扫描电子显微镜样品制备技术

扫描电子显微镜样品制备技术(preparationof specimens f来自or scanning electron microscopy):扫描电子镇显微镜以观察样品的表面形态为主，因此扫描电子显微镜样品的制备，必须满足以下要求:①保持完好的组织和细胞形态;③充360百科分暴露要观察的部位;③良好的导电性和较高的二次电子产额;④保持充分干燥的状态。

• 中文名 扫描电子显微镜样品制备技术
• 外文名 preparationof specimens for scanning electron microscopy
• 用 途 观察样品的表面形态
• 制备方式 首先采用化学或物理方法固定、脱水和干燥，然后喷镀碳与金属以提高材料的导电性和二次电子产额。
• 制备对象 生物材料

基本概述

　　某些含水量低且不易变形的生物材料，可以不经固定和干燥而在较低加速电压下直接观察，如动物毛发、昆虫、植物种子、花粉等，但图象质量差，而且观察和拍摄照片时须尽可能迅速。对大多数的生物材料，则应首先采用化学或物理方来自法固定、脱水和干燥，然后喷镀碳与金属以提高材料的导电360百科性和二次电子产额。

扫描电子显微镜样品制备技术

制备方法

　　化学方法制备样品的程序通常是：清洗→化学固定→干混足势县害燥→喷镀金属。

清洗

　　某些生物材料表面常附血液、细胞碎片、消化道意态受识商妈设养内的食物残渣、细菌、淋巴液及粘液等异物，掩盖着要观察的部位，因而，需要在固定之前用生理盐水或等渗缓冲液等把附着物清洗干净。亦可用5%碳酸钠冲洗或酶消化法去除这些异物。

固定

　　通常采用醛类（促错失首板歌写服主要是戊二醛和多聚甲醛）与四氧化锇双固定，也可用四氧化锇单固定。四氧化锇固定不仅可良好地保存组织细胞结构，而且能增加材料的导电性和二次电子产额，提高扫描电子显微图象的质量。这对高分辨扫描电子显微术是极端重要的。为增强这种效果，可用四氧须非化锇-单宁酸或是四氧化锇-珠叉二胼等反复处理材料，使其结合更多的重金属锇含松，这就是导电染色。

干燥

　　固定后通常采用临界点干燥法。其原理是：适当选最子迅好宁走择温度和压力，使液体达到临界状态（液态和气相间界面消失），从而避免在干燥过程中由水的表面张力所造成的样品变形。对含水生物材料直接进行临界点干燥时，水的临界温度和压力不能过高（37.4℃，218帕）。通常用乙醇或丙酮等使材料脱水，再用一种中间介质，如醋酸色坚差采派信戊酯，置换脱水剂，然后在临界点干燥器中用液体或固体二氧化碳、氟利昂13以及一氧化二氮等置换剂置换中间介质，进行临界干燥。

喷镀金属

容兵研宜本　　将干燥的样品用导电性好的粘合剂或其他粘合剂粘在金属企得妒功复践孩青烟祖样品台上，然后放在真空蒸发器中喷镀一层50～300埃厚的金属膜，以提高样品的导电性和二次电子产额，改善图象质量，并且防止样品受热和辐射损伤。如果采用离子溅射镀膜机喷镀金属，可获得均匀的细颗粒薄金属镀层，提高扫描电子图象的质量。

制备样品

　　低温扫描电子显微术是20世纪80年代迅速发展和广泛应用的方法。它包括生物样品的冷冻固定回者末答、冷冻干燥、冷冻割断和冷冻含水样品的扫描电子显微术等。

冷冻固定

　来自　将生物材料投入低温的致冷剂中，如液氦、液氮、液体氟利昂及丙烷等。快速冷冻可使生物组织细胞的结构和化学组成接近于生活状态。被冷冻固定的生物样品，可以在低温条件下转移到具有低温样品台的扫描电子显微镜中直接观察无需进一步处理或仅在冷冻样品表面喷镀一薄层金属。这种方法不仅快速简便，而且可以排除由于干燥法造成收缩的假象，特别适合于研究含水量很高的生物材料。

冷冻干燥

　　生物样品经冷冻固定后，其中的360百科水分冻结成冰，表面张力消失；密般专女岁学依再将冷冻样品放于真空中，使冰卫丰眼内序操面帝茶作发渐渐升华为水蒸气话读液。这样获得的干燥样品在一定程度上避免了表面张力造成的形态改变。由于水冷冻而形成的冰晶会破坏组织结构，府概建局误故用冰在真空中升华速度很慢，同时需要大型复杂的冷冻干燥装置，所以冷冻干燥法没有临界干燥法应用广泛。如果在冷冻前用有机溶剂置换样品中的水，而后，冷冻干燥，则可消除冰晶对结构的破坏，并大大缩短干燥时间；也无需特殊装置。

冷验冻割断

　　为了观察脏器或细胞内部结构，可切断冷冻样品，再经化学固定、导电染色、脱水和临界点干燥及喷镀金属，用扫描电镜观察割断表面暴露出的内部结构。冷冻割断又包括乙醇割断法、二甲基亚砜割断法吸滑般击始秋反及冷冻断裂法等多种。服氧定南材军厚动苏续吸用冷冻割断法可获得高分辨使象核药别洋属飞击的组织细胞内部三维构造的扫描电子显微镜图象。